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系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血單一核細(xì)胞中熱休克蛋白70表達(dá)

生活百科狼瘡

國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)狼瘡模型小鼠多臟器中有熱休克蛋白70(hsp70)表達(dá)增高［１］，sle患者皮損區(qū)細(xì)胞及外周血單一核細(xì)胞(pbmc)中均有hsp70表達(dá)增高［２，３］，我們通過(guò)檢測(cè)sle患者pbmc中hsp70表達(dá)水平，旨在探討hsp70在sle發(fā)病中的作用及其與疾病活動(dòng)的相關(guān)性 。

系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血單一核細(xì)胞中熱休克蛋白70表達(dá)

文章插圖

【系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血單一核細(xì)胞中熱休克蛋白70表達(dá)】 一、病例和方法
1.病例：我院門診和住院sle患者29例，均符合1982年ara診斷標(biāo)準(zhǔn)，男6例，女23例，平均年齡33.0±9.4歲，采集標(biāo)本時(shí)體溫均低于38℃ 。其中活動(dòng)期21例，平均年齡31.9±9.9歲，非活動(dòng)期8例，平均年齡36.0±7.8歲 。對(duì)照組為健康獻(xiàn)血員及實(shí)驗(yàn)室人員20例，男4例，女16例，平均年齡31.7±8.5歲 。
2.標(biāo)本采集：無(wú)菌抽取抗凝靜脈血4ml，并同時(shí)檢測(cè)sle患者抗dsdna抗體和尿蛋白水平 。
3.pbmc分離、裂解：用ficoll-hypaque離心法分離pbmc，計(jì)算pbmc總數(shù)，加入25μl/106個(gè)pbmc的懸浮緩沖液［0.1mol/l nacl，0.01mol/ltris·cl(ph7.6)，0.001mol/l edta，100μg/ml pmsf］，再加入等體積的加樣緩沖液［0.1mol/l tris·cl(ph6.8)，0.2mol/l dtt，4% sds，0.2%溴酚藍(lán)，20%甘油］，置沸水浴10分鐘，4000r/min離心10分鐘，置上清液于-20℃?zhèn)溆?。
4.免疫印跡分析：每樣本取50μl經(jīng)sds-page以分離蛋白質(zhì)，電轉(zhuǎn)膜(4℃、100ma、14h)后將硝酸纖維膜剪成條帶并封閉，加入1∶1000鼠抗hsp70單抗(sigma)，24小時(shí)后用pbs洗膜再加入1∶2000堿性磷酸酶標(biāo)記二抗(sigma)，2小時(shí)后pbs洗膜再加入生色底物顯色后中止反應(yīng) 。
5.統(tǒng)計(jì)分析：用成組設(shè)計(jì)兩樣本比較秩和檢驗(yàn)進(jìn)行sle組和對(duì)照組pbmc中hsp70表達(dá)比較分析 。用多樣本兩兩比較秩和檢驗(yàn)進(jìn)行活動(dòng)期sle、非活動(dòng)期sle、對(duì)照組pbmc中hsp70表達(dá)水平兩兩間比較分析 。sle組pbmc中hsp70表達(dá)與其抗dsdna抗體、尿蛋白水平之間用等級(jí)相關(guān)分析 。
二、結(jié)果
1.分級(jí)判斷各樣本膜上hsp70表達(dá)水平：強(qiáng)陽(yáng)性(++)：顯現(xiàn)極明顯蛋白帶；陽(yáng)性(+)：顯現(xiàn)較明顯蛋白帶；弱陽(yáng)性(±)：顯現(xiàn)不明顯蛋白帶；陰性(-)：未顯現(xiàn)蛋白帶 。其判斷結(jié)果見(jiàn)附表 。
經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)sle組pbmc中附表sle患者及對(duì)照組外周血單一核細(xì)胞中熱休克蛋白70表達(dá)水平
分 組例數(shù)表 達(dá) 分 級(jí) ?+++±-sle組2958124對(duì)照組2000119 hsp70表達(dá)水平較對(duì)照組有顯著升高(uc=3.517，p＜0.01) 。
2.統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示：活動(dòng)期sle患者pbmc中hsp70表達(dá)與對(duì)照組比較顯著升高(p＜0.01)；非活動(dòng)期sle患者與對(duì)照組比較也顯著升高(p＜0.05)；但活動(dòng)期與非活動(dòng)期患者pbmc中hsp70表達(dá)水平比較無(wú)顯著性差異(p＞0.05) 。
3.sle患者dsdna抗體、尿蛋白檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)活動(dòng)期sle組pbmc中hsp70表達(dá)水平與其抗dsdna抗體、尿蛋白水平均無(wú)相關(guān)性(r分別為-0.03和0.253，p均＞0.05) 。非活動(dòng)期組亦然(r分別為0.296和0.503，p均＞0.05) 。
三、討論
dhillon等［３］報(bào)道sle患者pbmc中hsp70表達(dá)增高 。sle患者皮損區(qū)［２］及狼瘡小鼠多臟器中［１］均有hsp70表達(dá)增加 。本研究發(fā)現(xiàn)sle患者pbmc中hsp70表達(dá)水平較對(duì)照組確有升高(p?.01)，且同時(shí)出現(xiàn)于活動(dòng)期和非活動(dòng)期sle患者中 。結(jié)合sle患者體內(nèi)hsp70基因轉(zhuǎn)錄水平［４］和狼瘡小鼠hsp70自身抗體［５］升高的報(bào)道，應(yīng)考慮到增高表達(dá)的hsp70可能作為一種自身抗原參與sle發(fā)病 。hsp70可參與免疫球蛋白合成和抗原遞呈，因此hsp70可能伴隨sle患者體內(nèi)自身抗體合成和自身抗原遞呈而表達(dá)增加 。部分sle患者pbmc中并無(wú)hsp70高表達(dá)(見(jiàn)附表)，因此認(rèn)為sle患者發(fā)病機(jī)理是多因素的，并非全與hsp70增高表達(dá)有關(guān) 。本研究還顯示活動(dòng)期與非活動(dòng)期sle患者pbmc中hsp70表達(dá)水平之間無(wú)顯著性差異，且表達(dá)水平與其抗dsdna抗體、尿蛋白水平比較無(wú)顯著性相關(guān)，而抗dsdna抗體陽(yáng)性和尿蛋白高水平通常出現(xiàn)于活動(dòng)期sle患者，是判斷sle患者病情活動(dòng)性的重要實(shí)驗(yàn)室指標(biāo) 。

經(jīng)驗(yàn)總結(jié)擴(kuò)展閱讀